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禽liu感病毒H5N1亞型PCR試劑盒

描述:禽liu感病毒H5N1亞型PCR試劑盒是上海臻科生物科技有限公司的產(chǎn)品,靈敏度好,準確性高,現(xiàn)貨供應(yīng),歡迎廣大新老客戶前來選購。

更新時間:2024-07-05
產(chǎn)品型號:50T
廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家
詳情介紹

【產(chǎn)品名稱】禽liu感病毒H5N1亞型PCR試劑盒

【包裝規(guī)格】 50T/盒

【產(chǎn)品方法】雙色實時熒光PCR法

【預期用途】

本試劑盒利用實時熒光PCR原理,定性檢測禽liu感病毒H5N1亞型,對禽liu感病毒H5N1亞型引起的***的診斷和監(jiān)控具有重要指導意義。

禽liu感病毒H5N1亞型PCR試劑盒【檢驗原理】

本試劑盒針對禽liu感病毒H5N1亞型高度保守區(qū)域設(shè)計特異性引物和探針,在反應(yīng)體系中含禽liu感病毒H5N1亞型基因組模板的情況下,PCR反應(yīng)得以進行并釋放熒光信號。利用儀器對PCR過程中相應(yīng)通道的信號強度進行實時監(jiān)測和輸出,實現(xiàn)檢測結(jié)果的定性分析。

【主要組成成份】

  RT-PCR反應(yīng)液

50T/盒

逆轉(zhuǎn)錄酶

750 μL×1管

 Taq酶

100 μL×1管

陽性對照

150 μL×1管

陰性對照

 40 μL×1管

說明書

1份


【儲存條件及有效期】

避光-20℃以下保存,避免反復凍融,有效期為12個月。

【適用儀器】
ABI 系列、Bio-Rad系列、Agilent Stratagene MX系列 、Roche LightCycler R480、Cepheid SmartCycler、Rotor-Gene系列、杭州博日系列等多通道實時熒光定量PCR儀。

【檢驗方法】

1.試劑準備(試劑準備區(qū))

(1)從冰箱中取出試劑盒, 從試劑盒中取出實驗所需試劑,充分融化混勻并瞬時離心以去除管壁附著液體。

(2)核算當次實驗所需要的反應(yīng)數(shù)(n),并根據(jù)如下表所示反應(yīng)體系計算當次實驗所需要的各種試劑量。

n =陰性對照數(shù)(1T)+陽性對照數(shù)(1T)+誤差預留量(1T)+樣本數(shù)

單反液配制表(每份)

RT-PCR反應(yīng)液

15.0 μL

逆轉(zhuǎn)錄酶

 2.0 μL

Taq酶

 3.0 μL

(3)在無菌離心管中加入上述試劑,充分混勻后瞬時離心。按照20 μL/管分裝量將試劑分裝至PCR反應(yīng)管。

(4)蓋緊PCR反應(yīng)管蓋后將PCR反應(yīng)管轉(zhuǎn)移至樣本處理區(qū)。剩余試劑放回-20℃以下冰箱冷凍保存。

2.樣本準備(樣本處理區(qū))

用QIAGEN、Roche公司DNA提qu試劑盒提quDNA,具體操作按照其試劑盒說明書操作。

3.加樣

   在上述制備好的PCR反應(yīng)管中分別加入處理好的待測標本RNA各5 μl、終體積25 μl/管,蓋好PCR反應(yīng)蓋混勻后瞬時低速離心,轉(zhuǎn)移到PCR儀器上。

    根據(jù)需要,在上述準備好的PCR反應(yīng)管中分別加入陰性對照品以及陽性對照品各5 μl,終體積為25 μl/管,蓋好PCR反應(yīng)蓋混勻后瞬時低速離心,轉(zhuǎn)移到PCR儀器上。

4.PCR(PCR擴增區(qū))

(1)取樣本處理區(qū)準備好的PCR反應(yīng)管,放置在實時熒光定量PCR儀樣品槽相應(yīng)位置,并記錄放置順序。

(2)按下表設(shè)置儀器核酸擴增相關(guān)參數(shù)進行PCR擴增。

注:ABI系列熒光PCR儀在設(shè)置時不選ROX校正,設(shè)置淬滅基團選擇None。

反應(yīng)體積

25 μL

通道選擇

FAM通道采集 AIV-H5熒光信號

HEX通道采集 AIV-N6熒光信號

 PCR

反應(yīng)

條件

步驟

條件

循環(huán)數(shù)

反轉(zhuǎn)錄

42℃:10分鐘(min)

1

預變性

95℃:3分鐘(min)

1

預擴增

95℃:5秒(s)

5

55℃:40秒(s)

PCR擴增

95℃:5秒(s)

40

55℃:40秒(s)

(此階段結(jié)束時采集熒光信號)


【參考值(參考范圍)】

1.試劑盒有效性判定:

(1)陽性對照:有典型S型擴增曲線或Ct值≤35。

(2)陰性對照:Ct值>38或無Ct值,線形為直線或輕微斜線,無指數(shù)增長期。

2.標本結(jié)果判定:

(1)陽性:標本檢測結(jié)果Ct值≤35或有明顯指數(shù)增長期。

(2)可疑:標本檢測結(jié)果Ct值在35~38范圍內(nèi)。此時應(yīng)對標本進行重復檢測,如重復實驗結(jié)果Ct值仍在35~38范圍內(nèi),有明顯指數(shù)增長期,則判定為陽性,否則為陰性。

(3)陰性:標本檢測結(jié)果Ct值>38或無Ct值。

【檢驗方法的局限性】

當檢測樣本中被檢核酸濃度含量低于本試劑盒的最di檢出限shi可能會發(fā)生假陰性的結(jié)果。

本試劑盒僅供標本初步篩查使用,對于本試劑盒檢測陽性結(jié)果應(yīng)進一步使用培養(yǎng)法進行確診。

【注意事項】

使用本試劑盒的實驗室,應(yīng)嚴格按照國家有關(guān)部分頒布的有關(guān)基因擴增檢驗實驗室管理規(guī)范進行管理;

為避免RNA降解,樣本處理過程應(yīng)在0-4℃條件下操作,且完成實驗后立即上機檢測;樣本處理過程中使用的器具耗材應(yīng)經(jīng)過無核酶處理;

各區(qū)域物品均為專用,不得交叉使用,以免污染;檢測結(jié)束后,應(yīng)立即對工作臺清潔;

吸取反應(yīng)液時,應(yīng)盡量避免產(chǎn)生氣泡;上PCR 儀前,應(yīng)注意檢查各反應(yīng)管是否蓋緊,以免液體蒸發(fā)造成結(jié)果不準確;

試劑盒所有試劑在使用前應(yīng)該在常溫下充分融化混勻,并應(yīng)瞬時離心;

試劑盒內(nèi)所配陰性和陽性對照在第一次使用前應(yīng)全部轉(zhuǎn)移至標本準備區(qū),并單獨存放;

為防止熒光干擾,應(yīng)避免裸手直接接觸PCR反應(yīng)管,并應(yīng)避免在PCR反應(yīng)管上進行任何標記;

檢測過程中使用過的吸頭,應(yīng)直接打到盛有10%次氯酸的廢物缸內(nèi),檢測結(jié)束的PCR 反應(yīng)管,切忌開蓋,并與其他廢棄物品一同滅菌后丟棄;工作臺及各種實驗用品應(yīng)定期用10%次氯酸、75%酒精或紫外燈進行消毒;

9.儀器擴增相關(guān)參數(shù)應(yīng)按照本說明書相關(guān)要求進行設(shè)置;不同批號試劑不能混用;并在有效期內(nèi)使用。

【相關(guān)產(chǎn)品】

ZK-D-0206牛細小病毒(BPV)核酸檢測試劑盒(熒光-PCR法)
ZK-D-0207牛腺病毒3型(BAV-3)核酸檢測試劑盒(熒光-PCR法)
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